Composition and microbiological quality of refrigerated raw milk in two seasons of the year in Santa Helena, Western Paraná / Composição e qualidade microbiológica do leite cru refrigerado em duas estações do ano em Santa Helena, oeste do Paraná / Composición y calidad microbiológica de la leche cruda refrigerada en dos estaciones del año en Santa Helena, oeste de Paraná

This study aimed at quantifying the occurrence of proteolytic psychotropic microorganisms and total coliforms in refrigerated raw milk, in addition to assessing the quality through its physical-chemical composition. The samples were collected in 10 dairy farms in the municipality of Santa Helena ­ Western Paraná. Two collections were made, one during the spring and the other during the summer. Samples of refrigerated raw milk were carried out directly from the cooling tank, aseptically, packed in sterile bottles and transported under isothermal conditions (± 4 ºC) to the laboratory where the physical-chemical composition and microbial populations were determined. The levels of fat had great amplitude between the seasons, being higher in the summer, while there was no variation for the contents of protein, lactose, minerals, and non-fat solids. The total coliform count did not differ between seasons. The values obtained for proteolytic psychotropic counts were higher in the summer. A significant positive correlation was found between the total coliform counts, the proteolytic psychotropic counts (r=0.73), the levels of protein (r=0.45), non-fat solids (r=0.45), and minerals (r=0.46). Also, the proteolytic psychotropic counts showed a positive correlation with the cryoscopic index. The milk components met the requirements of NI76. The quality of refrigerated raw milk in the municipality of Santa Helena, Western Paraná was not satisfactory for total coliforms, due to its high incidence, indicating the need for good practices in milking management. Proteolytic psychotropic bacteria presented low proliferation, thus not affecting milk quality.(AU)

O presente estudo teve como objetivo quantificar a ocorrência de microrganismos psicrotróficos proteolíticos e de coliformes totais em leite cru refrigerado além de avaliar a qualidade por meio da sua composição físico-química. As amostras foram coletadas em 10 propriedades leiteiras no município de Santa Helena ­ Oeste do Paraná. Foram realizadas duas coletas, uma durante a primavera e outra no verão. As amostragens do leite cru refrigerado foram realizadas diretamente no tanque de resfriamento, de forma asséptica, acondicionado em frascos esterilizados e transportado sob condições isotérmicas (± 4ºC) ao laboratório onde foram determinadas a composição físico-química e as populações microbianas. Os teores de gordura tiveram grande amplitude entre as estações do ano, sendo superior no verão, enquanto que não houve variação para os teores de proteína, lactose, minerais e sólidos desengordurados. A contagem de coliformes totais não diferiu entre as estações. Os valores obtidos para contagens de psicrotróficos proteolíticos foram superiores no verão. Foi constatada correlação significativa positiva entre as contagens de coliformes totais com as contagens de psicrotróficos proteolíticos (r=0,73) e os teores de proteína (r=0,45), sólidos desengordurados (r=0,45) e minerais (r=0,46). Além disto, as contagens de psicrotróficos proteolíticos apresentaram correlação positiva com o índice crioscópico. Os componentes do leite atenderam as exigências da IN76. A qualidade do leite cru refrigerado no município de Santa Helena, Oeste do Paraná não foi satisfatória em relação aos coliformes totais, devido sua alta incidência, indicando a necessidade de boas práticas no manejo de ordenha. As bactérias psicrotróficas proteolíticas tiveram baixa proliferação, não afetando a qualidade do leite.(AU)

El presente estudio tuvo como objetivo cuantificar la ocurrencia de microorganismos psicrotróficos proteolíticos y de coliformes totales en leche cruda refrigerada, además de evaluar la calidad a través de su composición fisicoquímica. Las muestras fueron recolectadas en 10 granjas lecheras del municipio de Santa Helena ­ Oeste de Paraná. Se realizaron dos colecciones, una en primavera y otra en verano. Las muestras de leche cruda enfriada se realizaron directamente en el tanque de enfriamiento, de forma aséptica, se empacaron en botellas estériles y se transportaron en condiciones isotérmicas (± 4ºC) al laboratorio donde se determinó la composición fisicoquímica y las poblaciones microbianas. Los niveles de grasa tuvieron gran amplitud entre las estaciones, siendo más altos en verano, mientras que no hubo variación para los contenidos de proteínas, lactosa, minerales y sólidos desgrasados. El recuento total de coliformes no difirió entre temporadas. Los valores obtenidos para los recuentos de psicotrópicos proteolíticos fueron mayores en verano. Se encontró una correlación positiva significativa entre los recuentos de coliformes totales y los recuentos de psicrótroficos proteolíticos (r=0.73) y los niveles de proteínas (r=0.45), sólidos desgrasados (r=0.45) y minerales (r=0.46). Además, los recuentos de psicrótroficos proteolíticos mostraron una correlación positiva con el índice crioscópico. Los componentes de la leche cumplieron con los requisitos de IN76. La calidad de la leche cruda refrigerada en el municipio de Santa Helena, Oeste de Paraná no fue satisfactoria en relación a los coliformes totales, debido a su alta incidencia, lo que indica la necesidad de buenas prácticas en el manejo del ordeño. Las bacterias psicrotróficas proteolíticas tuvieron baja proliferación, no afectando la calidad de la leche.(AU)

Influence of time and storage temperature on raw milk deteriorating microbiota / Influência do tempo e temperatura de estocagem sobre a microbiota deteriorante do leite cru

The quality of raw milk depends on initial microbial contamination and conditions of storage until industry processing. Considering the influence of time and storage temperature on raw milk microbiota, the objective of this work was to quantify and monitor the multiplication of these groups under different conditions. For this purpose, 41 samples of raw milk were collected immediately after milking, stored in the following storage conditions: 25 °C/2 h; 35 °C/2 h; 7 °C/24 h; 7 °C/48 h and 7 °C/60 h and analyses of aerobic mesophilic, psychrotrophic and proteolytic psychrotrophic microorganisms. The milk samples analyzed in the study had an initial mean count of mesophilic aerobes of 5.38 Log CFU/mL at Time Zero. The milk stored at 25 °C/2 h and 35 °C/2 h kept the mesophilic aerobic counts within the limits established by the legislation (5.48 Log CFU/mL), with an increase in counts of psychrotrophic and proteolytic microorganisms. When stored at 7 °C/24 h and 7 °C/48 h, the count of mesophiles exceeded the established parameters. A significant increase in the count of proteolytic psychrotrophs and psychrotrophs was also observed during storage at 7 °C from 24 h. The results of this study indicate that the temperature of 7 °C is not suitable for the milk conservation, since it was not able to control the microbial multiplication. Thus, the results contribute to the change in milk storage temperature proposed by the new Brazilian legislation.(AU)

A qualidade do leite cru depende da contaminação microbiana inicial e das condições de armazenamento até o processamento na indústria. Considerando a influência do tempo e da temperatura de armazenamento na microbiota do leite cru, o objetivo deste trabalho foi quantificar e monitorar a multiplicação desses grupos de microrganismos sob diferentes condições. Para tanto, foram coletadas 41 amostras de leite cru imediatamente após a ordenha, armazenadas nas seguintes condições de armazenamento: 25 °C/2 h; 35 °C/2 h; 7 °C/24 h; 7 °C/48 h e 7 °C/60 h para análise de microrganismos psicrotróficos, aeróbios mesófilos, psicrotróficos e proteolíticos. As amostras de leite analisadas no estudo apresentaram uma contagem média inicial de aeróbios mesófilos de 5.38 Log UFC/mL no Tempo Zero. O leite armazenado a 25 °C/2 h e 35 °C/2 h manteve as contagens aeróbias mesófilas dentro dos limites estabelecidos pela legislação (5,48 Log UFC/mL), com aumento nas contagens de microrganismos psicrotróficos e proteolíticos. Quando armazenado a 7 °C/24 h e 7 °C/48 h a contagem de mesófilos excedeu os parâmetros estabelecidos. Um aumento significativo na contagem de psicrotróficos e psicrotróficos proteolíticos também foi observado durante o armazenamento a 7 °C a partir das 24 h. Os resultados deste estudo indicam que a temperatura de 7 °C não é adequada para a conservação do leite, uma vez que não foi capaz de controlar a multiplicação microbiana. Assim, os resultados contribuem para a mudança na temperatura de armazenamento de leite proposta pela nova legislação brasileira.(AU)

Pseudomonas spp. and other psychrotrophic microorganisms in inspected and non-inspected Brazilian Minas Frescal cheese: proteolytic, lipolytic and AprX production potential / Pseudomonas spp. e outros micro-organismos psicrotróficos em queijos Minas Frescal inspecionados e não inspecionados: potencial proteolítico, lipolítico e produção de AprX

The most consumed cheese in Brazil, Minas Frescal cheese (MFC) is highly susceptible to microbial contamination and clandestine production and commercialization can pose a risk to consumer health. The storage of this fresh product under refrigeration, although more appropriate, may favor the growth of spoilage psychrotrophic bacteria. The objective of this study was to quantify and compare Pseudomonas spp. and other psychrotrophic bacteria in inspected and non-inspected MFC samples, evaluate their lipolytic and proteolytic activities and their metalloprotease production potentials. Twenty MFC samples were evaluated: 10 inspected and 10 non-inspected. Counts of psychrotrophic bacteria and Pseudomonas spp., evaluation of the proteolytic and lipolytic potential of the isolates, and identification of potential producers of alkaline metalloprotease (AprX) were assessed. The mean total psychrotrophic counts were 1.07 (±2.18) × 109CFU/g in the inspected samples and 4.5 (±5.86) × 108CFU/g in the non-inspected, with no significant difference (p=0.37). The average score of Pseudomonas spp. was 6.86 (±18.6) × 105 and 2.08 (±3.65) × 106 CFU/g for the inspected and non-inspected MFC samples, respectively, with no significant difference (p=0.1). Pseudomonas spp. represented 0.06% and 0.004% of psychrotrophic bacteria found in inspected and non-inspected MFC samples, respectively. Collectively, 694 psychrotrophic strains and 47Pseudomonas spp. were isolated, of which 59.9% and 68.1% were simultaneously proteolytic and lipolytic, respectively. Of the 470 psychrotrophs isolated from inspected and 224 from non-inspected cheese samples, 5.74% and 2.23% contained aprX, respectively, while 100 and 86.96% of the Pseudomonas spp. isolates in inspected and non-inspected cheese samples contained the gene. The production potential of AprX did not, however, determine the proteolytic activity on plates of these isolates under the conditions evaluated in this study. Of total, 65.63% of the psychrotrophs that contained aprX gene were confirmed as Pseudomonas spp., using genus-specific PCR. Phylogenetic analysis of the 16S rRNA gene of the other psychrotrophs that were potential producers of AprX identified them as Serratia spp. (n=7), Raoultella ornithinolytica (n=1), and Acinetobacter schindleri (n=1) in the inspected samples and Psychrobacter sanguinis (n=1) and Leuconostoc mesenteroides (n=1) in the non-inspected samples. The production conditions of Brazilian MFC of these samples, while meeting the legal determinations, are not sufficient to control Pseudomonas and other spoilage-related psychrotrophs. Thus, stricter hygienic measures are required during the formal production of this type of cheese.(AU)

O mais consumido no Brasil, o queijo Minas Frescal (QMF) é altamente suscetível à contaminação microbiana e a produção e comercialização clandestina podem representar um risco para a saúde do consumidor. O armazenamento deste produto fresco sob refrigeração, embora mais apropriado, pode favorecer a multiplicação de bactérias psicrotróficas deteriorantes. O objetivo deste estudo foi quantificar e comparar Pseudomonas spp. e outras bactérias psicrotróficas em amostras de QMF inspecionadas e não inspecionadas, avaliar o potencial lipolítico, proteolítico e de produção de metaloprotease alcalina. Vinte amostras de QMF foram avaliadas: 10 inspecionadas e 10 não inspecionadas. Foram avaliadas as contagens de bactérias psicrotróficas e Pseudomonas spp., o potencial proteolítico e lipolítico dos isolados e a identificação de potenciais produtores de metaloprotease alcalina (AprX). A média total das contagens de bactérias psicrotróficas foi de 1,07 (±2,18) × 109UFC/g nas amostras inspecionadas e 4,5 (±5,86) × 108UFC/g nas não inspecionadas, sem diferença significativa (p=0,37). A média de Pseudomonasspp. foi de 6,86 (±18,6) × 105 e 2,08 (±3,65) × 106UFC/g para as amostras QMF inspecionadas e não-inspecionadas, respectivamente, sem diferença significativa (p=0,1). Pseudomonas spp. representaram 0,06% e 0,004% de bactérias psicrotróficas encontradas em amostras QMF inspecionadas e não-inspecionadas, respectivamente. Das amostras inspecionadas e não inspecionadas, foram isoladas 694 colônias psicrotróficas e 47 Pseudomonasspp., dos quais 59,9% e 68,1% foram simultaneamente proteolíticos e lipolíticos, respectivamente. Dos 470 isolados de psicrotróficos das amostras de queijo inspecionados e dos 224 isolados das não inspecionadas, 5,74% e 2,23% continham o gene aprX, respectivamente, enquanto 100 e 86,96% das Pseudomonasspp. isoladas em amostras de queijo inspecionadas e não inspecionadas continham o potencial de expressão de AprX. Esse potencial, no entanto, não determinou a atividade proteolítica em placas desses isolados nas condições avaliadas neste estudo. Do total, 65,63% dos psicrotróficos que continham o gene aprX foram confirmados como Pseudomonasspp., utilizando PCR gênero-específico. A análise filogenética do gene 16S rRNA dos outros psicrotróficos que foram produtores potenciais de AprX os identificou como Serratia spp. (n=7), Raoultella ornithinolytica (n=1) e Acinetobacter schindleri (n=1) nas amostras inspecionadas e Psychrobacter sanguinis (n=1) e Leuconostoc mesenteroides (n=1) nas amostras não inspecionadas. As condições de produção do QMF dessas amostras, atendendo às determinações legais, não são suficientes para controlar a Pseudomonas e outros psicrotróficos relacionados à deterioração. Assim, medidas higiênicas mais rígidas são necessárias durante a produção formal deste tipo de queijo.(AU)

Avaliação microbiológica de filés de surubim (Pseudoplatystoma spp) submetidos à defumação com alecrim / Microbiological evaluation of fillets of surubim (Pseudoplatystoma spp) submitted to defumation with rosemary

O objetivo foi avaliar a microbiota dos filés de surubim (Pseudoplatystoma spp.) submetidos à defumação com alecrim. Foram coletados fragmentos dos filés para cada etapa de avaliação (in natura, salmoura e defumação em 2, 4, e 6 horas). Da salga para a defumação houve uma redução, no qual, os microrganismos aeróbios mesófilos diminuíram de 1,4x105UFC/g para 1,8x104 UFC/g nos filés sem alecrim e 1,4x104 UFC/g nos filés com alecrim e na contagem de microrganismos aeróbios psicrotróficos foi observada redução de 1,9x105UFC/g para 7,8x104 UFC/g nos filés sem alecrim e 2,6x104 UFC/g nos filés com alecrim. Portanto, os filés adicionados de alecrim apresentaram queda constante e mais brusca na contagem bacteriana e resultou em uma boa redução da carga bacteriana.

Diagnóstico e propostas de ações visando a melhoria da qualidade microbiológica do leite cru recebido em um laticínio localizado no Sul de Minas Gerais / Diagnosis and proposed actions aiming the improvement of the microbiological quality of raw milk received in a dairy located in the South of Minas Gerais

O objetivo deste estudo foi verificar a qualidade microbiológica do leite cru refrigerado recebido no Laticínio de uma Cooperativa localizada no Sul do Estado de Minas Gerais e propor ações corretivas. Amostras de leite foram coletadas dos compartimentos dos tanques de caminhões em três dias diferentes, plaqueadas em duplicata em Ágar Padrão para Contagem e incubadas a 7ºC por 10 dias. Foram identificadas 92 espécies através de espectrofotometria de massas MALDI-TOF-MS. Entre os isolados identificados o gênero Pseudomonas foi predominante, sendo conhecido por possuir grande capacidade de produção de enzimas degradativas em leite cru refrigerado. Foi possível verificar que somente o resfriamento do leite não garante a sua qualidade microbiológica, sendo necessárias outras ações visando à redução da contaminação microbiológica inicial do leite cru.

Proteolytic and lipolytic potential of Pseudomonas spp. from goat and bovine raw milk / Potencial proteolítico e lipolítico de espécies de Pseudomonas do leite cru caprino e bovino

Pseudomonas, the main genus of gram-negative microorganisms isolated from milk, is psychrotrophic, biofilm-forming, and thermo-resistant deteriorating enzyme producers. The aim of this study was to quantify Pseudomonas spp. in goat's and cow's milk produced in the Paraná state, Brazil, to evaluate the deteriorating activity of the isolates at mesophilic and psychrotrophic conditions and to identify, at the species level, the isolates with alkaline metalloprotease (aprX gene) production potential. Microbiological, biochemical and molecular methods were used for isolating, confirming and identifying of isolates. The mean counts were 1.6 (±6.3)x104 and 0.89(±3)x102 CFU/mL for goat and bovine milk samples, respectively, immediately after milking. Of the Pseudomonas colonies isolated from goat milk (n=60), 91.7% showed proteolytic potential when incubated at 35°C/48 h and 80% at 7°C/10 days, and lipolytic potential was observed in 95% of the isolates incubated in mesophilic and 78.3% at refrigeration conditions. From the isolates of bovine milk (n=20), 35% showed proteolytic activity only when incubated at 35°C/48 h, and lipolytic potential was observed in 25% of the isolates incubated at 7°C/10d and 35°C/48h. It was observed that 83.3% and 25% of the isolates genetically confirmed as Pseudomonas spp. of goat and bovine milk showed the potential for alkaline metalloprotease production, with the species P. azotoformans, P. koreensis, P. gessardii, P. monteilii and P. lurida being the most frequent in goat milk and P. aeruginosa the only species identified in cow milk.(AU)

Pseudomonas é o principal gênero de micro-organismos Gram negativos isolados do leite, são psicrotróficos, formadores de biofilmes e produtores de enzimas deteriorantes termodúricas. O objetivo do presente trabalho foi quantificar Pseudomonas spp. no leite de cabras e vacas produzido no estado do Paraná, Brasil, avaliar a atividade deteriorante em temperatura mesofílica e psicrotrófica e identificar, em nível de espécie, os isolados com potencial de produção de metaloprotease alcalina (geneaprX). Foram utilizados métodos microbiológicos, bioquímicos e moleculares para isolamento, confirmação e identificação dos isolados. As contagens médias foram de 1,6 (±6,3) x 104 e 0,9 (±3) x 102 UFC/mL para as amostras de leite caprino e bovino, respectivamente. Dos isolados de Pseudomonas do leite de cabra (n=60), 91,7% demonstraram potencial proteolítico quando incubadas a 35°C/48h e 80% a 7°C/10dias e lipolíticos em 95% dos isolados incubados em mesofilia e em 78,3% dos incubados em temperatura de refrigeração. Dos isolados do leite bovino (n=20), foi verificada atividade proteolítica de 35% apenas quando incubadas a 35°C/48h e lipolítica em 25% dos isolados incubados a 7°C/10d e 35°C/48h. Foi observado que 83,3% e 25% dos isolados confirmados geneticamente como Pseudomonas spp. do leite caprino e bovino, respectivamente, apresentaram o potencial de produção de metaloprotease alcalina, sendo as espécies P. azotoformans, P. koreensis, P. gessardii, P. monteilii e P. lurida as mais frequentes no leite de cabras e P. aeruginosa a única identificada do leite de vacas.(AU)

Variação da qualidade microbiológica, durante o período de validade, de leite pasteurizado em laticínio da cidade de Januária-MG / Variation of the microbiological quality, during the period of validity, of pasteurized milk in dairy of the city of Januaria-MG

Por sua composição, o leite é considerado um dos alimentos mais completos em termos nutricionais e por essa mesma razão constitui um excelente meio para proliferação de micro-organismos patogênicos. A pasteurização, quando feita de forma correta, visa acabar com esses micro-organismos, mas quando o leite é produzido em condições higiênicas inadequadas ou é mal conservado nos pontos de venda pode se transformar em um veículo para transmissão de doenças. Este trabalho teve como objetivo avaliar a segurança microbiológica, durante o período de validade, do leite pasteurizado produzido em um laticínio da cidade de Januária-MG. Foram analisadas amostras de leite pasteurizado no primeiro e no último dia de validade. Foram realizadas contagens de micro-organismos mesófilos aerofílicos, bactérias coliformes totais e a 45°C, bactérias psicrotróficas e enterobactérias. Nenhuma amostra apresentou contaminação por bactérias psicrotróficas. Foram encontradas contagens de micro-organismos coliformes totais e coliformes a 45°C acima dos valores máximos permitidos pela legislação brasileira, representando um risco para a saúde dos consumidores.

Lipolytic capacity of Pseudomonas spp. isolated from refrigerated raw milk / Capacidade lipolítica de Pseudomonas spp. isoladas de leite cru refrigerado

The psychrotrophic bacteria growth in refrigerated milk is responsible for the production of heat resistant enzymes, including those which have lipolytic capacity. Lipases can cause rancidity and off-flavor in pasteurized and UHT milk, milk powder and cheese. Pseudomonas spp. is the major genera responsible by lipases synthesis, mainly Pseudomonas fluorescens. The lipolytic capacity of Pseudomonas spp. (1182 strains) and P. fluorescens (158 strains) isolated from cooling tank and bulk milk transportation were tested. Pseudomonas spp. strains were isolated by Pseudomonas Agar Base, adding the supplement cephalotin, fusidic acid, cetrimide- CFC (30º C/48 h) and Pseudomonas Cetrimide Agar with 10% of glicerol (21º C/ 48 h) to determine P. fluorescens. The strains lipolytic capacity were tested with Tributyrin Agar (21 oC/72 h). Lipolytic indexes of Pseudomonas spp. were 51.4% and 67.2% in cooling tank and bulk milk transportation (p< 0.05), respectively. P. fluorescens lipolytic capacity indexes were 26.4% from strains isolated from cooling tank and 41% (p < 0.05) from strains isolated from bulk milk transportation. High lipolytic indexes had been found in the strains isolated from refrigerated raw milk sent to manufacturing. Refrigeration temperature and storage time may contribute to the difference observed between two points of collection evaluated in this study.

A multiplicação de bactérias psicrotróficas em leite refrigerado pode promover a síntese de enzimas resistentes ao calor, entre elas aquelas que tem capacidade lipolítica. As lipases podem promover rancidez, e defeitos de sabor em leite pasteurizado, UHT, leite em pós e queijos. Pseudomonas spp. é o principal gênero responsável pela síntese desta enzimas, principalmente a espécie Pseudomonas fluorescens. Avaliou-se a capacidade lipolítica de 1182 cepas de Pseudomonas spp. e 158 cepas de P. fluorescens isoladas de amostras de leite de tanques de resfriamento (TR) e caminhão tanque (CT) enviado ao beneficiamento. Foi utilizado o Agar base Pseudomonas com suplemento cephalotin, fusidic acid, cetrimide - CFC (30º C/48 h ) para isolamento das pseudomonas e Pseudomonas Cetrimide Agar com 10% de glicerol (21º C/ 48 h) para a espécie P. fluorescens. Para avaliação da capacidade lipolítica as cepas fora semeadas em Ágar Tributirina (21 ºC/72 h). O índice de lipólise das cepas de Pseudomonas spp. provenientes do leite do tanque de resfriamento e do caminhão tanque (p<0,05) foram de 51,4% e 62,7%, respectivamente. Foram também observados índices de capacidade lipolítica de P. fluorescens de 26,4% e 41% (p<0,05) para TR e CT, respectivamente. Altos índices de cepas lipolíticas foram encontrados nas cepas isoladas do leite cru refrigerado enviado ao beneficiamento. Temperatura de refrigeração e tempo de estocagem podem ter contribuído para a diferença observada na população lipolítica dos dois pontos de coleta avaliados.

Microbiological quality of refrigerated raw milk in the dairy farm and after transport to the processing dairy plant / Qualidade microbiológica do leite cru refrigerado na propriedade produtora de leite e após o transporte para a indústria beneficiadora

Transport of cooled raw milk in bulk has greatly improved the quality of the raw material collected by dairy plants as it reduces the proliferation of mesophilic microorganisms that cause milk acidity and hinder its processing. However, refrigeration has favored the growth of psychrotrophic microorganisms which are able to grow at low temperatures (below 10ºC) and that produce heat resistant enzymes which degrade some milk components, reducing milk shelf life and causing organoleptic changes. The aim of this paper was to evaluate the microbiological quality of raw milk in dairy farms and after its transport to the processing dairy plant, through plate counting of mesophilic and psychrotrophic microorganisms. Fourteen milk samples were collected from tanks of the dairy-farming properties, and one sample was collected from their milk transport tanker at the entrance of the processing plant. Our results showed that the mean number of mesophilic microorganisms was higher in samples collected straight from the dairy farm tanks than in the samples collected from the transportation tankers at the entrance of the plant. Of the 14 sampled tanks, 64.3% were non-compliant with legislation. The sample collected from the milk transportation tanker containing milk from all properties showed a higher mean number of psychrotrophic microorganisms than the dairy farm samples. We conclude that the milk from dairy properties showed a higher amount of mesophilic microorganisms, and after transportation, at the entrance of the processing plant, there is a higher amount of psychrotrophic microorganisms.(AU)

O transporte do leite cru refrigerado a granel melhorou muito a qualidade da matéria-prima recebida pelas indústrias de laticínios, reduzindo a proliferação de micro-organismos mesófilos que causam a acidez do leite e que impossibilitam seu beneficiamento. Porém, a refrigeração favoreceu o crescimento de micro-organismos psicrotróficos que são capazes de crescer em baixas temperaturas (abaixo de 10ºC) e que produzem enzimas termorresistentes que degradam alguns componentes do leite, diminuindo o seu tempo de prateleira e causando alterações organolépticas. Este trabalho teve como objetivo avaliar a qualidade microbiológica do leite cru presente na propriedade leiteira e após o transporte para a indústria beneficiadora, por meio da contagem em placas de micro-organismos mesófilos e psicrotróficos. Foram coletadas 14 amostras de leite nos tanques das propriedades produtoras e uma amostra do caminhão de transporte dessas propriedades, na chegada à indústria beneficiadora. Os resultados mostraram que, nas amostras coletadas diretamente nos tanques das propriedades, a média de micro-organismos mesófilos foi mais alta do que a amostra coletada diretamente do caminhão de transporte ao chegar à indústria. Dos 14 tanques amostrados, 64,3% estão em desacordo com a legislação. A amostra coletada do caminhão de transporte do leite, contendo o leite de todas as propriedades, apresentou média maior de micro-organismos psicrotróficos em relação à média das propriedades. Conclui-se que o leite das propriedades apresentou maior quantidade de mesófilos e que, após o transporte, na chegada à indústria beneficiadora, há maior quantidade de psicrotróficos.(AU)

Avaliação microbiológica de leite pasteurizado produzido em laticínio do município de Januária-MG / Microbiological evaluation of pasteurized milk produced in dairy municipality of Januaria-MG

Com o objetivo de avaliar a qualidade microbiológica de leite pasteurizado produzido em laticínio do município de Januária - MG, foram analisadas amostras de leite no período de março a agosto de 2014. Foram realizadas as contagens de aeróbios mesofílicos, enterobactérias, coliformes totais, coliformes a 45ºC e psicrotróficos. Das amostras analisadas, todas apresentaram contaminação por enterobactérias e coliformes totais, 80% estavam contaminadas por coliformes a 45°C e 60% por Escherichia coli. Todas as amostras analisadas estavam de acordo com os padrões estabelecidos pela legislação brasileira para mesófilos aeróbios e bactérias psicrotróficas. Os resultados demonstraram que o produto pode representar risco à saúde pública, enfatizando a necessidade de adoção de boas práticas de fabricação para prevenir a contaminação e o crescimento bacteriano.

Behavior of Staphylococcus aureus and autochthone microbiota in fresh sausages added of sodium nitrite and stored under refrigeration / Comportamento de Staphylococcus aureus e microbiota autóctone frente à ação de nitrito de sódio em linguiças frescais estocadas sob refrigeração

Fresh sausages are cured meat products that may be contaminated with Staphylococcus aureus during the manufacturing procedure, which is frequently related with inadequate handling practices. The use of nitrite in meat products has proven efficacy against Clostridium botulinum, and studies indicate that bactericidal action against S. aureus depends on factors that are intrinsic and extrinsic to the product. The objective of the present study was to evaluate the effect of nitrite concentration, and pH on S. aureus and psychrotrophic autochthone microbiota in fresh sausages stored at different times and temperatures. Fresh sausage were produced at nitrite concentrations 50, 150 and 200ppm and contaminated with S. aureus. The sausages were storage at refrigeration (7 and 12°C) and the quantification of S. aureus and psychrotrophic microorganisms was carried out on days 0, 2, 4, 7, and 10. Results showed that nitrite concentrations and the temperatures used had minimal effect on the multiplication of S. aureus and psychrotrophic autochthone microbiota. Final counts depended only on the length of storage: at the end of 10 days, counts were statistically similar in the different groups, showing that temperature and nitrite concentrations used did not control microbial growth effectively. It is suggested that the product should be stored below 7°C or at freezing temperatures for greater microbiological stability.

A linguiça frescal é um embutido curado que, devido à manipulação durante as etapas de produção, pode se tornar contaminado com S. aureus, patógeno frequentemente relacionado com práticas inadequadas de higiene durante a produção de alimentos. A utilização de nitrito em embutidos tem sua eficácia comprovada contra C. botulinum e, para o S. aureus, estudos indicam que a ação bactericida depende de fatores extrínsecos e intrínsecos. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da concentração de nitrito e do pH frente à contaminação por S. aureus e microbiota autóctone em linguiças frescais estocadas em diferente tempos e temperaturas. Linguiças foram produzidas com concentrações de 50, 150 e 200ppm de nitrito e contaminadas com S. aureus. As linguiças foram armazenadas sob refrigeração (7 e 12°C) e a quantificação de S. aureus e psicrotróficos foi realizada nos dias 0, 2, 4, 7 e 10. Os resultados demonstraram que a influência das concentrações de nitrito e temperaturas utilizadas sobre a multiplicação de S. aureus e da microbiota autóctone foi mínima, sendo dependente apenas do período de estocagem. Entretanto, ao final de dez dias, as contagens foram estatisticamente iguais nos grupos analisados, mostrando que as condições de temperatura e concentrações de nitrito utilizadas não exerceram controle efetivo no desenvolvimento destes micro-organismos. Sugere-se que este produto seja armazenado sob temperaturas inferiores a 7°C ou sob congelamento para maior estabilidade microbiológica.

Ocorrência de Aeromonas sp. e microrganismos psicrotróficos e estimativa do prazo de validade comercial de filé de pintado (Pseudoplatystoma coruscans) mantidos sob refrigeração / Occurrence of Aeromonas sp. and psychrotrophic microorganisms and estimate the shelf life of "pintado" (Pseudoplatystoma coruscans) fillets kept under refrigeration

Verificou-se a ocorrência de bactérias do gênero Aeromonas e estimou-se o prazo de validade comercial de filés de pintado (Pseudoplatystoma coruscans) com pele, durante estocagem em refrigeração por meio da quantificação de microrganismos heterotróficos aeróbios psicrotróficos e análises físico-químicas para determinação do pH e detecção de amônia e gás sulfídrico. Foram utilizadas 45 amostras de filé de pintado, com aproximadamente 100 gramas cada, embaladas individualmente em polietileno de alta densidade e armazenadas em câmara frigorífica entre 0ºC e 3ºC. A cada dois a três dias de estocagem, três unidades de filés foram submetidas a análises microbiológicas e físico-químicas, totalizando 15 análises durante o período de estocagem. As contagens de Aeromonas sp. e microrganismos heterotróficos aeróbios psicrotróficos variaram de 1,89 a 9,47logUFC/g e 0 a 6,54logUFC/g, respectivamente. A variação do pH foi de 6,20 a 6,97, e as análises de amônia e gás sulfídrico foram negativas durante todo o período. O pH dos filés de pintado atingiu o limite máximo de 6,4 aos 23 dias de estocagem, e estimou-se o seu prazo de validade comercial.

This word studied the occurrence of bacteria from genus Aeromonas and estimate the shelf life of "pintado" fish fillets (Pseudoplatystoma coruscans), during cold storage, through the quantification of psychrotrophic aerobic microorganisms, physical and chemical analyses for presence of ammonia and gas sulphide (H2S) and pH as used in 45 samples of "pintado" fillets with approximately 100 grams each, individually packed in high density polyethylene and stored in cold storage (0ºC to 3ºC). Every 2-3 days of storage, 3 units of fillets were subjected to microbiological and physicochemical analysis for a total of 15 days during the storage period. The Aeromonas sp. and psychrotrophic microorganisms count varied from 1.89 to 9.47logCFU/g and 0 to 6.54logCFU/g, respectively. The pH variation was from 6.20 to 6.97 and ammonia and H2S analyses were negative during the whole period. According under Brazilian legislation (Brazil, 1981) estimated the commercial shelf life of "pintado" fillets being 23 days when the pH reached a value of 6.4. The pH of the "pintado" fillets reached the maximum limit of 6.4 at 23 days of storage, being its estimated commercial shelf life.

Características microbiológicas de leite integral e bebida láctea processados por UAT (Ultra Alta Temperatura) ao longo do período de validade / Microbiological characteristics of whole milk and dairy drink processed by UHT (Ultra-High Temperature) during its shelf life

O leite integral e a bebida láctea UAT são submetidos ao mesmo tratamento térmico, mas são produtos diferentes, já que na bebida láctea é permitida a adição de até 50% de soro lácteo. Neste estudo, objetivou-se avaliar as características microbiológicas destes produtos com relação à legislação vigente do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) e, ainda, da população psicrotrófica, ao longo do período de validade. Foram analisadas 150 amostras, 75 de cada produto, a partir de cinco diferentes marcas comerciais nacionais. As 15 amostras de cada marca foram subdivididas em três lotes: início, meio e final do período de validade, cada qual com cinco amostras do mesmo lote. Verificou-se para o leite que todas as amostras de leite UAT estavam de acordo com a legislação vigente. A população de psicrotróficos aumentou em 26,6% das amostras depois que foram abertas e mantidas sob refrigeração por 48 horas. Os resultados para a bebida láctea evidenciaram que 12% das amostras estavam em desacordo com o estabelecido pela legislação vigente. A população de psicrotróficos aumentou em 36% das amostras depois que foram abertas e mantidas sob refrigeração por 48 horas. Tais resultados devem servir de alerta para a necessidade de fiscalização mais rigorosa da bebida láctea UAT, pois parte das amostras não atenderam aos padrões microbiológicos estabelecidos pela legislação.

UHT milk and dairy drinks are submitted to the same heat treatment, but they are different products, since the addition of up to 50% of whey is allowed in dairy drinks. The aim of this study was to evaluate the microbiological characteristics of these products in relation to current legislation, during the course of their shelf life. In the present study, 150 samples, 75 of each type of product, from 5 different national brands were analyzed. The 15 samples of each brand were separated into 3 lots containing 5 samples each, analyzed at the beginning, middle and end of the validity period. Upon microbiological analysis all UHT milk samples were in conformance with current legislation. After the samples were opened and chilled for 48 hours, 26.6% of them presented an increased psychrotrophic population. The dairy drink results showed that 12% of the samples were out of conformance with the current legislation. After the samples were opened and chilled for 48 hours, 36% of them presented an increased psychrotrophic population. These results should be considered as an alert in regard to the need for rigorous inspection of UHT milk and dairy drink products.

Evolução da proteólise do leite inoculado in vitro pseudomonas fluorescens / Evolution of the inoculated milk proteolysisin vitro with pseudomonas fluorescens

O presente estudo foi realizado no Laboratório de Microbiologia do Centro de Pesquisa em Alimentos da Escola de Veterinária da Universidade Federal de Goiás, visando detectar a proteólise em leite causada por Pseudomonas fluorescens. Foram adquiridas cepas liofilizadas de P. fluorescens ATCC 13525 do Instituto Adolfo Lutz, Seção de Coleção de Culturas. Após o crescimento das cepas de P. fluorescens determinaram-se quantidades que correspondessem a 100.000, 500.000 e 1.000.000 de UFC/mL para ser realizada a inoculação in vitro em amostras de leite desnatado reconstituído a 12% (LDR 12%) e esterilizado. Os experimentos de crescimento das cepas de P. fluorescens foram conduzidos em alíquotas de 40 mL de LDR 12%, sendo as amostras incubadas a 4ºC, 7ºC e 10ºC em refrigerador. Durante o período de incubação, as amostras foram avaliadas a cada 24 horas até se atingir o período de 120 horas. As amostras também foram submetidas à análise para verificar a presença de caseinomacropeptídeo (CMP) pela técnica de Cromatografia a Líquido de Alta Eficiência. O crescimento de P. fluorescens no leite desnatado reconstituído a 12% não foi significativo nas temperaturas de estocagem de 4, 7 e 10ºC, verificando-se significância apenas para o tempo de estocagem. Não foi constatada a presença de CMP nas amostras avaliadas.

Variação da qualidade do leite cru refrigerado em função do período do ano e do tipo de ordenha / Change in the quality of cooled raw milk due to the year period and type of milking

O objetivo desta investigação foi de avaliar a qualidade do leite cru refrigerado estocado em propriedades rurais nos períodos de tempo chuvoso e seco. As amostras foram avaliadas quanto a CCS, CBT, composição centesimal, contagem de microrganismos psicrotróficos e acidez titulável; os dados foram submetidos à análise de variância. Os fatores analisados foram: período do ano (chuvoso ou seco) e tipo de ordenha (manual ou mecânica), em delineamento inteiramente randômico e em arranjo fatorial 2 x 2. A comparação dos resultados em função do período de ano e tipo de ordenha foi realizada por meio do teste F da análise de variância; utilizando-se o programa software SISVAR. A taxa de CBT do leite cru refrigerado estava acima do limite estabelecido pela legislação, o que serve de alerta aos produtores e indústrias na obtenção e processamento de leite com qualidade higiênico-sanitária adequada.

The present investigation aims at evaluating the quality of cooled raw milk stored in dairy farms duringrainy and dry weathers. The collected samples were analyzed on SCC, TBC, centesimal composition, psychrotrophics count and titratable acidity; the variance analysis was employed for evaluating the observeddata. The analyzed factors were weather period (rainy or dry) and milking procedure (manual or mechanical), in a random delineation and in factorial arrangement 2 x 2. The data comparison as per year period and milking technique was performed by means of variance analysis (F-test), using the SISVAR software. The TBC rate of cooled raw milk was over the limit established by the legislation in effect, which indicated the inadequate hygienic-sanitary quality of the cooled raw milk samples analyzed.

Pesquisa de Salmonella spp. e microrganismos indicadores em carcaças de frango e água de tanques de pré-resfriamento em abatedouro de aves / Research of Salmonella spp. and indicators microorganisms in poultrycarcasses and chilling tanks water in poultry slaughterhouse

O objetivo desse trabalho foi pesquisar Salmonella spp. e microrganismos indicadores (coliformestotais-CT, coliformes termotolerantes-CTT, aeróbios mesófilos-AM e microrganismos psicrotróficos-MP) em carcaças de frango e água dos tanques de pré-resfriamento em um frigorífico do norte do Paraná.Foram analisadas 120 carcaças de frango (60 antes do pré-chiller e 60 após a saída do chiller) e 120amostras de água (60 pré-chiller e 60 do chiller), totalizando 20 coletas. Para as análises utilizaram-se ametodologia recomendada pela legislação brasileira e sistema PetrfilmTMAC. Salmonella spp. foi isoladaem uma carcaça antes do pré-chiller e outra após a saída do chiller, ambas identificadas como SalmonellaO8, 20: z4, z23. Nas amostras de água foram isolados e identificados seis sorovares no pré-chiller, cincoSalmonella O8,20;z4,z23 e um S. Tennessee. As médias de CT nas carcaças antes do pré-chiller e após asaída do chiller e na água destes tanques foram 3,74 NMP/g, 3,10 NMP/g e 4,00 NMP/100mL / 2,81 NMP/100mL respectivamente; CTT 3,65 NMP/g / 3,00 NMP/g e 3,81 NMP/100mL / 2,73 NMP/100mL; AM 6,40UFC/g / 5,60 UFC/g e 4,40 UFC/mL / 4,13 UFC/mL; MP 4,21 UFC/g e de 3,66 UFC/g. Nas carcaças defrango antes do pré-chiller e após o chiller e na água do pré-chiller e chiller não foi observadadiferença significativa (p>0,05) nos índices de contaminação com relação aos microrganismos indicadoresestudados. Pelos resultados obtidos pode-se concluir que no frigorífico estudado não houve reduçãoda contaminação bacteriana das carcaças durante a passagem pelos tanques.

The purpose of this work was to research the Salmonella spp. and indicators microorganisms (total coliforms-CT, thermotolerant coliforms-CTT, mesophlic aerobes-AM and psychotrophic microorganisms) in poultry carcasses and chilling tanks water in a poultry slaughterhouse in north of Paraná state. Had been analyzed 120 poultry carcasses (60 before the entrance in the chilling tank and 60 after the exit of the chilling tank) and 120 water samples (60 from pre-chiller tank and 60 from chiller tank), totalizing 20 collections. For the analyses was used the brazilian legislation and PetrifilmTMAC. Salmonella spp. was isolated in one poultry carcass before the entrance in the chilling tank and other after the exit of the chilling tank, both identified as Salmonella O8,20;z4,z23. In the water samples was recognized six serovars in pre-chiller tank, five as Salmonella O8,20;z4,z23 and one S. Tennessee. The means of TC on carcasses before the entrance and after the exit of the tanks and in the water samples from pre-chiller tank and in chiller were 3,74 MPN/g / 3,10 MPN/g and 4,00 MPN/100mL / 2,81 MPN/100mL respectively; the mean of TCC was 3,65 MPN/g / 3,00 MPN/g and 3,81 MPN/100mL / 2,73 MPN/100mL; the mean of MA was 6,40 CFU/g / 5,60 CFU/g and 4,40 CFU/mL e 4,13 CFU/mL; the mean of MP was 4,21 CFU/g /3,66 CFU/g and . It was not observed any significant difference (p>0,05) in contamination index neither in poultry carcasses nor in tank water samples. It is possible to conclude that chilling tanks were not able to remove the microorganisms from the carcasses and could contribute to cross-contamination due to elevate water contamination.

Eficácia dos tanques de pré-resfriamento na redução de contaminação bacteriana em carcaças de frango / Chilling tanks effectiveness on the reduction of bacterial contamination of poultry carcasses

O objetivo desta pesquisa foi avaliar a eficácia dos tanques de pré-resfriamento na redução da contaminação microbiana de carcaças de frango. As amostras foram coletadas de um abatedouro no período de março a setembro de 2005, totalizando 20 coletas. Foram coletadas amostras de carcaças em três horários representando o início, meio e final do turno matutino de abate sendo 60 amostras (20 em cada horário) antes da entrada no pré-chiller e 60 amostras (20 em cada horário) após a saída do chiller. As amostras de frango foram submetidas à pesquisa de coliformes totais (CT), coliformes termotolerantes (CTT), aeróbios mesófilos (AM) e psicrotróficos (MP). A enumeração de CT e CCT foi realizada através da técnica dos tubos múltiplos, a de AM através do sistema Petrifilm tmC e a contagem de MP em Agar Padrão para Contagem. As médias mais elevadas do número mais provável de CT e CTT (3,83 log NMP/g e 3,78 log NMP/g, respectivamente) e das contagens de AM e MP (6,61 log UFC/g e 4,58 log UFC/g, respectivamente) nas carcaças ocorreram no primeiro horário de coleta, antes da entrada no pré-chiller. Observou-se uma diminuição significativa (p<0,05) do NMP de CT e CTT e contagem de AM nas carcaças, após a saída dos tanques de resfriamento, no primeiro horário de coleta, indicando que os tanques de pré-resfriamento, no frigorífico estudado, foram eficazes na remoção de microrganismos das carcaças apenas no início dos trabalhos de abate. Não foi detectada a presença de CT e CTT nas amostras de águas de abastecimento.